急、慢性吗啡依赖大鼠脑内Gi₂蛋白的表达

目的研究吗啡依赖大鼠腹侧背盖区(VTA)、伏隔核(NAc)、前额皮质(PC)、海马及蓝斑(LC)各脑区Ⅱ型抑制性鸟苷酸结合蛋白(Gi2蛋白)的改变,探讨吗啡依赖的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为6组,分别为急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、急性空白对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组和慢性空白对照组。建立吗啡依赖大鼠模型。戒断组腹腔注射纳洛酮5mg/kg,作用30min。断头处死各组大鼠,取出脑组织,进行冰冻切片。用免疫组化技术检测NAc、PC、LC、VTA和海马的相对Gi2蛋白水平。结果急性吗啡依赖组和戒断组与急性空白对照组比较,NAc区Gi2蛋白水平明显降低(P<0·01)。慢性吗啡依赖组和戒断组与慢性空白对照组比较,NAc区Gi2蛋白水平明显降低(P<0·01),LC区Gi2蛋白水平明显升高(P<0·01)。结论吗啡依赖可引起大鼠脑内Gi2蛋白水平发生改变,但各脑区Gi2蛋白水平的变化并不相同。Gi2蛋白水平改变可能是吗啡耐受和依赖潜在的分子机制。

全身淋巴结X线照射预处理在活体肾脏移植中的应用

目的探讨非清髓性全身淋巴结照射(TLI)预处理在活体供肾肾移植中应用的安全性和有效性。方法共5例受体接受了TLI,平均年龄27岁。供受体的HLA-A、B、DR6个抗原中4个抗原错配1例,3个抗原错配2例,1个抗原错配2例。供肾切取均采用手辅助腹腔镜活体供肾切取手术。TLI治疗从移植手术前5天开始,90cGy/d,共5天。术中和术后的免疫抑制药物方案与同时期的活体或尸体肾移植相同,但剂量略减少。术后定期检测受体外周静脉血白细胞绝对值;流式细胞仪检测T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和Th1、Th2亚群的变化;观察免疫抑制药物的使用情况、移植肾状态、急性排斥反应频率和相关副作用。结果受体外周血白细胞在术后的1~2周达最低值,12周观察期内均未恢复到移植术前水平。T细胞总数和CD4+T细胞、CD8+T细胞在术后的1~2周内达最低值,300天的观察期内未恢复到移植前水平;在TLI治疗后Th1细胞百分比减少,Th2细胞百分比略有增加,因此Th2细胞相对增多。观察期内未发生移植肾排斥反应,移植肾功能正常。免疫抑制剂使用量低于同时期的其他活体肾脏移植和尸体肾脏移植受体。没有任何感染等并发症发生。结论非清髓性TLI是一种安全有效的免疫抑制治疗手段,可以获得较长时间的免疫抑制状态,在减少肾脏移植排斥反应的基础上,减少了其他非特异性免疫抑制剂的应用,是一个理想的活体肾脏移植的预处理方案。

人Slitrk1基因对PC12细胞增殖和分化的影响

目的研究人Slitrk1基因过表达对PC12细胞增殖和分化的影响。方法PCR扩增人Slitrk1CDS,克隆到pcDNA4/myc-HisA载体,构建重组质粒pcDNA4/St1,分别以空载体和重组质粒转染PC12细胞,RT-PCR法鉴定出阳性转染细胞,观察空载体转染的PC12细胞(pcDNA4/PC12)和过表达Slitrk1的PC12细胞(ST1/PC12)的表型并用MTT法检测细胞增殖情况。结果与空载体转染的PC12细胞相比,过表达Slitrk1基因的细胞增殖速度明显减慢。pcDNA4/PC12与野生型PC12细胞表型一致,均为悬浮成团生长,细胞少有突起,而ST1/PC12细胞大部分贴壁生长,突起多见,呈分化状态。结论过表达人Slitrk1基因能够抑制PC12细胞增殖,促进细胞的贴壁及突起长出。人Slitrk1基因可能有促进PC12细胞神经分化的作用。

WEB2170对血小板活化因子所致肝损伤的保护作用

目的研究血小板活化因子(PAF)对肝脏的损伤作用及其拮抗剂WEB2170的预防保护作用。方法体内实验,45只Wistar大鼠随机均分为对照组、PAF损伤组和WEB2170预处理组,测定血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)和肝组织丙二醛(MDA)水平,组化染色积分光密度法测定线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,观察肝组织形态学改变。体外实验,应用DPH探针测定培养肝细胞膜流动性的变化,观察用PAF刺激培养的Kupffer细胞产生肿瘤坏死因子(TNF)和MDA的情况。结果体内实验:PAF可致大鼠血清AST、ALT、LDH及组织MDA升高(P<0·05~0·01),SDH酶染色积分光密度值(Dλ)降低,WEB2170预处理可减轻上述改变(P<0·05~0·01);体外实验,PAF可使肝细胞膜流动性降低(P<0·01),而WEB2170(50ng/ml)可减轻PAF所导致膜的流动性降低(P<0·05);PAF可刺激Kupffer细胞产生TNF、MDA(P<0·01),呈剂量依赖性,可被WEB2170显著抑制(P<0·01)。结论PAF对肝脏有损害作用,其拮抗剂WEB2170对PAF所致肝脏损害有一定的保护作用。

1,25-二羟维生素D₃对Th1优势应答大鼠免疫功能的影响

目的研究1,25-二羟维生素D31,25-(OH)2D3对内毒素(LPS)诱导的Th1优势应答大鼠T细胞免疫功能的影响。方法以1,25-(OH)2D3喂饲Lewis大鼠,1μg/d,共14天,对照组给予同体积的赋形剂,第15天大鼠腹腔注射LPS10ng/kg。每组25只大鼠,各留10只观察死亡率,其余大鼠6h后处死,留取标本,观察1,25-(OH)2D3对大鼠免疫细胞的细胞因子分泌、表型分化和细胞增殖的影响。结果注射LPS后观察96h,对照组大鼠24h内死亡5只(5/10),其余5只大鼠96h内均存活,实验组大鼠无死亡(0/10)。与对照组比较,实验组大鼠外周血IL-12和IFN-γ水平显著降低(3986±328pg/mlvs4160±289pg/ml,4840pg/ml±802pg/mlvs5264pg/ml±524pg/ml,P<0·05),IL-4水平显著升高(5·57±1·75pg/mlvs3·72±1·6pg/ml,P<0·05)。脾脏HE及PCNA免疫组化染色显示实验组大鼠白髓中淋巴细胞显著减少,PCNA阳性细胞呈局灶性或散在分布。流式细胞仪检测显示,实验组大鼠外周血CD4+CD25+淋巴细胞百分率(%)显著高于对照组(1·09±0·29vs0·73±0·00,P<0·01)。结论1,25-(OH)2D3能减轻致死剂量的LPS对大鼠的损伤,对Th1优势应答大鼠免疫细胞的细胞因子分泌、淋巴细胞增殖和细胞亚群分化具有调控作用。

脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区脑红蛋白的表达变化

目的研究脑缺血再灌注损伤后脑红蛋白(NGB)在大脑皮质和海马区的表达变化。方法采用双侧颈总动脉夹闭法制备沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型,在缺血20min后分别再灌注2、8、16、24、48、72h,处死动物并取脑,采用免疫组化染色结合阳性细胞计数的方法,检测脑缺血再灌注损伤后大脑皮质和海马区NGB的表达变化。结果沙鼠脑缺血再灌注损伤后,大脑皮质的NGB蛋白表达于损伤后16~48h上调,而海马区NGB表达则呈持续减少的趋势。病理学检测显示海马区神经细胞损伤程度较大脑皮质区严重。结论不同脑区对缺血性损伤的耐受性差异可能与NGB表达水平有关。NGB表达上调可能对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

异丙酚预处理对全脑缺血再灌注大鼠脑组织S100β和神经元特异性烯醇化酶的影响

目的探讨异丙酚预处理对全脑缺血再灌注大鼠脑组织S100β及神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响,评价异丙酚对脑组织的保护作用。方法30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(A组)、单纯脑缺血再灌注组(B组)和缺血前2h异丙酚预处理组(C组),每组10只,C组动物在缺血前腹腔注射异丙酚100mg/kg,采用线栓法制作全脑缺血再灌注模型,于脑缺血再灌注后24h评估并记录动物的神经行为学评分,测定大鼠脑组织S100β和NSE含量。结果异丙酚预处理组神经行为学评分较单纯脑缺血再灌注组高(P<0·05),假手术组评分也明显高于单纯脑缺血再灌注组(P<0·05),异丙酚预处理组脑组织中S100β和NSE含量明显低于单纯脑缺血再灌注组(P<0·05)。结论异丙酚可以降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织S100β和NSE的含量,减轻神经损害,缺血前2h异丙酚预处理可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为学评分,有明显的脑保护作用。

利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白的研究

目的建立并评价一种去除母乳中高丰度蛋白的方法,使低丰度蛋白得到富集,为通过蛋白质组学技术发现母乳中的重要活性蛋白奠定基础。方法将母乳作为混合蛋白抗原免疫动物制备多克隆抗体,随后用此多克隆抗体通过免疫亲和层析技术去除母乳中的高丰度蛋白,采用免疫印迹法对免疫亲和层析的效果进行验证。结果母乳中的4种高丰度蛋白均得到一定程度的去除,建立了去除母乳中高丰度蛋白的新方法。结论通过混合抗原所制备的多克隆抗体可有效去除其中的高丰度抗原,并可使低丰度蛋白得到富集。这一方法也可用于提高血浆等样品中低丰度蛋白的检出效率。

降钙素基因相关肽对急性肺损伤大鼠AQP1表达的影响

人参皂苷Rg₁对急性心肌梗死后VEGF和HIF-1α的作用

目的研究人参皂苷Rg1对急性心肌梗死(AMI)后血管新生的影响及其作用机制。方法建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,104只大鼠分为假手术组、急性心肌梗死对照组、人参皂苷Rg1低剂量治疗组(1mg/kg)和高剂量治疗组(5mg/kg),于术后3、7、10、14天测定梗死区微血管密度,RT-PCR法检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mR-NA,免疫组化法检测VEGF在梗死区内的表达。结果梗死区的血管生成数量稳定持续的增加,治疗组显著高于对照组(P<0·01);心肌梗死后VEGF、HIF-1αmRNA表达随缺血时间的延长(3、7、10天组)有增高趋势,治疗组明显升高(P<0·01),14天时VEGF的增长出现停止或下降,而HIF-1α继续升高;假手术组VEGF表达明显低于各手术组。结论严重缺血可刺激心肌组织产生大量的VEGF、HIF-1α,其对缺血心肌起保护作用,人参皂苷Rg1可通过增加其表达而刺激心肌梗死区的血管生成和侧支循环建立。

库普弗细胞在肝再生调控中的作用机制

目的探讨库普弗细胞(KC)在肝部分切除(PH)后再生调控中的作用及机制。方法制备KC条件培养液(KCCM),用MTT法观察其对大鼠原代肝细胞增殖的作用;建立小鼠PH模型,测定KC灭活对肝再生率的影响;应用免疫组化方法检测KC灭活后再生肝中TNF-α、TGF-α和TGF-β1的表达特点。结果KCCM能明显促进原代肝细胞增殖(A=0·746±0·06),与对照组(A=0·536±0·06)相比有显著性差异(P<0·01);KC灭活伴PH后6天肝再生率为95·10%±4·52%,而单纯PH后6天肝再生率为74·50%±1·90%(P<0·01);免疫组化结果显示,小鼠PH后6h,再生肝细胞TNF-α、TGF-α和TGF-β1表达迅速升高,前两者可持续4~5天,而后者在第3天即转为阴性,但在KC灭活伴PH后第6天,3种因子的表达仍然较强,超过单纯PH组。结论在肝再生过程中,KC和其他间质细胞分泌的TNF-α和TGF-α因受到KC分泌的TGF-β1等因子的拮抗而不能充分发挥促肝再生作用;当KC活性被抑制时,TNF-α和TGF-α的活性不再受到拮抗,进而能够增强肝再生能力和加速再生过程。

喉返神经医源性损伤模型的建立及其神经监护研究

目的研究不同类型医源性损伤对家兔颈段喉返神经(RLN)功能的影响。方法将20只新西兰白兔随机分为4组(牵拉组、结扎组、电凝组、钳夹组),模拟临床甲状腺手术中可能发生的颈段RLN常见损伤,建立4种医源性RLN损伤的动物模型,应用运动神经功能监护仪经插入式双极电极采集复合肌肉动作电位(CMAP),获取不同类型损伤后诱发喉肌电图的最小刺激电流强度阈值(MSCIT)。采用自身对照方法,与自身损伤前结果比较。结果新西兰兔RLN损伤前的平均MSCIT为0·05mA,损伤后各组(牵拉组、结扎组、电凝组、钳夹组)的平均MSCIT分别为0·24mA、1·04mA、≥3·0mA和2·81mA,牵拉组与对照组比较,钳夹组与电凝组比较,无显著差异(P>0·05),其余各组间有显著差异(P<0·05)。结论电凝和钳夹对神经功能的影响最为显著,结扎和牵拉的影响相对较小,RLN具有一定的抗牵拉作用。

脊髓再灌注损伤的临床诊断及围手术期处理

目的总结脊髓再灌注损伤的临床表现及临床诊断参考依据。方法回顾性分析2000~2005年15例术后发生脊髓再灌注损伤患者的临床表现,以及在其后进行的处理方法。结果脊髓再灌注损伤患者均于术后3h以内出现自下而上的进行性运动和感觉功能障碍,即刻大剂量甲泼尼龙及神经营养药物治疗有助于挽救脊髓功能,其诊断需在排除脊髓受压的器质性因素后回顾性确诊。本组共15例患者术后出现不同程度的脊髓再灌注损伤,经对症治疗后,8例完全恢复正常,4例症状基本改善,生活可完全自理,3例症状改善不理想。结论脊髓再灌注损伤在临床上虽然少见,但后果严重,妥善的处理是改善患者生存质量的关键。

等效剂量曲马朵、丁丙诺啡与吗啡用于术后病人自控镇痛的比较

目的比较曲马朵、丁丙诺啡与吗啡用于术后病人自控静脉镇痛(PCIA)的效果及副作用。方法53例ASAⅠ~Ⅱ级上腹部择期手术患者随机分为曲马朵组(T组,n=18)、丁丙诺啡组(B组,n=17)和吗啡组(M组,n=18),镇痛用药分别为10mg/ml曲马朵、0·03mg/ml丁丙诺啡及1mg/ml吗啡,辅助用药均为0·1mg/ml氟哌利多。采用BaxterAPⅡ型电脑泵,按负荷量2·5ml+持续量0·5ml/h+单次量1ml(LCP)模式给药。术后4、8、16、24h分别记录病人镇痛评分(VAS)、舒适评分(BCS)、镇静评分(Ramsay评分)、24h镇痛药物用量、按压次数/实际给药次数比值(D/D比值)以及恶心、呕吐、皮肤瘙痒、呼吸抑制等不良反应发生情况。结果3组病人各时间点VAS及BCS评分无显著性差异(P>0·05),但T组D/D比值及术后24h镇痛药物用量明显大于其他两组(P<0·05)。B组2例、M组1例患者出现嗜睡,但3组Ramsay评分无显著性差异(P>0·05);T组8例、B组5例、M组4例出现恶心;T组1例、B组2例,M组3例出现皮肤瘙痒。结论曲马朵与丁丙诺啡可安全地用于上腹部手术后病人自控静脉镇痛,但其临床效应并未超过吗啡。

内窥镜下静脉交通支断离术联合Muller术治疗下肢静脉曲张

目的探讨内窥镜下静脉交通支断离术(SEPS)联合Muller术治疗下肢静脉曲张的可行性。方法2005年9月~2006年3月,经静脉顺行造影诊断下肢静脉交通支瓣膜功能不全患肢41条,随机选择31条患肢(Ⅰ组)行SEPS术,在深筋膜下断离病变交通支,联合Muller术抽剥浅表曲张静脉,保留健康大隐静脉。另10条患肢(Ⅱ组)行传统大隐静脉抽剥术。结果Ⅰ组曲张静脉团块消失,下肢静脉血淤滞得到缓解,色素沉着减轻,溃疡愈合,随访5~11个月无复发。与Ⅱ组相比,Ⅰ组手术时间平均缩短1·5h,缝合创口平均减少4·3个,住院时间平均缩短4·8天,差异有显著意义(P<0·01)。结论SEPS联合Muller术适合个体化微创治疗下肢静脉曲张,创伤小,恢复快。

应用TCD探讨高血压病患者脑血管病变特点的研究

目的应用经颅多普勒超声(TCD)探讨高血压病各期患者脑血管损伤的程度,为闭塞性脑血管疾病的防治提供依据。方法收集高血压病患者176例,采用TCD探查颅内动脉的收缩期血流速度(Vs)、舒张期血流速度(Vd)、平均血流速度(Vm)、搏动指数(PI)等血流动力学参数,并进行统计学分析。结果高血压Ⅰ期组颅内动脉血流速度普遍升高,以大脑中动脉、颈内动脉终末端血流速度增快明显;高血压Ⅱ期组、Ⅲ期组随着血压的逐渐升高,颅内动脉的血流速度逐渐减缓,以大脑中动脉、颈内动脉终末端及基底动脉血流速度减缓显著。高血压各组TCD检测总异常率77%,Ⅱ、Ⅲ期高血压病组的异常率分别为90%和96%。结论TCD检测的脑血管血流动力学特点与卒中特点吻合,可作为高血压病所致闭塞性脑血管疾病早期发现和早期防治的有效手段。

免疫调节细胞的临床应用研究进展

人胃癌、胃非癌组织SSTR1、SSTR3与P-ERK表达关系的研究

异丙酚对脑缺血再灌注迟发性神经元损伤的保护作用

高龄患者股骨粗隆间不稳定骨折的治疗

Medical Journal of Chinese People′s Liberation Army INSTRUCTIONS TO AUTHORS