- 朱伟;黄文;武新颖;徐纪平;蔡全才;李兆申;
目的探讨血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管内皮细胞黏附因-1(sVCAM-1)和P选择素检测对胰腺癌诊断和预后评估的临床价值。方法2007年10月-2008年6月收治的胰腺癌患者70例,包括胰头癌45例,胰体、胰尾癌25例;TNM分期Ⅰ-Ⅱ期34例,Ⅲ-Ⅳ期36例。采用酶联免疫法(ELISA)法测定患者手术前后血清sICAM-1、sVCAM-1和P选择素水平,并与30例胰腺良性病变患者进行比较。结果胰腺癌患者血清sICAM-1、sVCAM-1和P选择素水平明显高于胰腺良性病变患者(P<0.01);Ⅲ-Ⅳ期胰腺癌患者血清sICAM-1、sVCAM-1和P选择素水平明显高于I-Ⅱ期患者(P<0.05)。sICAM-1、sVCAM-1和P选择素检测的敏感度分别为81.4%、85.7%、84.3%,三者联合检测的敏感度为92.9%。行根治性手术组(39例)术后血清sI-CAM-1、sVCAM-1和P选择素水平均较术前显著降低(P<0.05),而姑息性手术组(31例)则无明显变化(P>0.05)。结论血清sI-CAM-1、sVCAM-1和P选择素水平是胰腺癌诊断和预后判断的敏感性指标,三者联合应用可提高胰腺癌早期诊断的敏感性。
2009年01期 v.34 10-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 115K] [下载次数：149 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 黄文;赵航;徐纪平;金震东;朱伟;李兆申;
目的评估超声内镜对胰腺癌早期诊断的价值。方法2007年1月-2007年6月经手术病理确诊为胰腺癌的患者126例,明确诊断前半月内均接受过超声(US)、超声内镜(EUS)及螺旋CT(SCT)检查,术后证实为小胰腺癌(癌块直径≤2cm)28例,癌块直径>2cm者98例。比较术前接受US、SCT和EUS检查的影像学异常发现率、诊断准确率及间接征象准确率等,探讨超声内镜对胰腺癌早期诊断的价值。结果联合应用EUS及SCT检查,胰腺癌异常影像的发现率、诊断准确率大为提高,与单独应用US、EUS或SCT相比,有显著性差异(P<0.05);以术后病理报告为标准,在评估胰周组织浸润、血管侵犯等间接征象方面EUS与SCT无显著性差异(P>0.05);对小胰腺癌的诊断,EUS诊断准确率显著高于US和SCT(P<0.05)。结论EUS在胰腺癌早期诊断中有重要价值,EUS联合SCT能提高胰腺癌的早期检出率。
2009年01期 v.34 13-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K] [下载次数：351 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 吕顺莉;高军;李淑德;黄文;龚燕芳;李兆申;
目的研究胰腺癌胰液差异蛋白质丝氨酸蛋白酶2(PRSS2)在胰腺癌组织和细胞株中的表达,为临床胰腺癌的早期诊断及治疗提供新靶点。方法在4株胰腺癌细胞株、20例胰腺癌组织及20例正常胰腺组织中,以PCR法检测PRSS2 mRNA的表达,并分析其与胰腺癌临床特征之间的关系。结果PRSS2在正常胰腺、胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中均有表达,在胰腺癌和正常组织中的相对表达量(RQ值)分别为33.76(6.47,107.98)和3.74(0.96,28.83),前者明显高于后者(P<0.05);PRSS2在癌组织中的表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移、血清CA19-9水平、血清CEA水平均无相关性。结论胰腺癌胰液中的PRSS2可作为胰腺癌诊断的潜在肿瘤标志物;从胰液筛查差异蛋白质作为胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物是可行的。
2009年01期 v.34 16-17+26页 [查看摘要][在线阅读][下载 150K] [下载次数：195 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 曹佳;高军;杜奕奇;李兆申;黄文;龚燕芳;张玲;宋健;金晶;吴洪玉;
目的探讨神经元正五聚蛋白2(NPTX2)基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测2例正常胰腺组织及ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、PANC-1、SW1990等6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况,并对产物进行测序验证。利用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理细胞株ASPC1及PANC1,再运用qRT-PCR及SYBR Green荧光掺入甲基化特异性定量PCR法检测NPTX2基因的mRNA水平及甲基化程度。结果MSP结果显示正常胰腺组织中NPTX2基因未发生甲基化,而在6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因均有不同程度的甲基化。胰腺癌细胞株ASPC1及PANC-1在5-Aza-dC处理前的甲基化指数(MI)分别为0.964、0.472,mRNA表达的相对值(RQ)分别为5.251和0,而处理后的MI分别为0.531、0.226,RQ分别为5.965和1.076。结论NPTX2基因启动子的高甲基化是该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一。
2009年01期 v.34 18-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 194K] [下载次数：180 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 徐岷;高军;高道键;张玉琦;杜奕奇;刘枫;龚燕芳;吴洪玉;李兆申;
目的研究沉默DNA甲基转移酶1(DNMTl)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和细胞周期的影响及可能机制。方法培养的人胰腺癌PaTu8988细胞分为空白对照组、阴性siRNA(15nmol/L)组、阴性siRNA(30nmol/L)组、DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组。转染48h后,采用real-time PCR和Western blotting评价沉默效率和细胞周期调控基因p21的表达情况;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果转染48h后,15nmol/L和30nmol/L浓度的DN-MT1 siRNA均明显抑制了DNMT1 mRNA和蛋白的表达;DNMT1 siRNA转染后人胰腺癌PaTu8988细胞增殖受抑制,各组细胞增殖抑制率依次为0%±12.0%、13.7%±8.2%、23.4%±7.3%、17.1%±5.8%和36.9%±14.2%,其中DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的细胞增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.01);DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的G2/M期细胞百分率均显著低于其他各组,S期细胞百分率明显高于其他各组(P<0.05);DNMT1 siRNA(30nmol/L)组细胞周期调控基因p21 mRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.01)。结论DNMTl siRNA能特异性抑制胰腺癌细胞DNMTl的表达,并抑制细胞增殖、促使细胞出现S期阻滞,其机制可能与上调细胞周期调控基因p21的表达有关。
2009年01期 v.34 21-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K] [下载次数：212 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 张玲;高军;李兆申;杜奕奇;龚燕芳;黄文;金晶;吴洪玉;满晓华;
目的在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定。方法双酶切pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经NotI和EcoRI双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性酶切、PCR和测序验证正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,采用Western blotting鉴定表达产物,亲和层析法纯化GST-NPTX2蛋白。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pGEX4T-1-NPTX2构建成功,表达产物相对分子量为70kD左右,与预期值相符,Western blotting证实该蛋白具有免疫反应特异性,亲和层析法获得了纯化的GST-NPTX2蛋白。结论构建了pGEX-4T-NPTX2原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了GST-NPTX2融合蛋白。亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究NPTX2的生物学功能奠定了基础。
2009年01期 v.34 24-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 177K] [下载次数：307 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ]
- 于燕;邹曰坤;胡森;杨红明;周国勇;柴家科;盛志勇;
目的探讨卡巴胆碱对脂多糖(LPS)刺激后人外周血单核细胞释放炎症介质的影响及其受体机制。方法取正常献血者外周血,密度梯度离心法分离单个核细胞,再利用单核细胞的贴壁性,分离获得单核细胞。用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液重悬,调整细胞浓度为2×105/ml后,加入包被了特异性捕获抗体(TNF-α、IL-6、IL-10)的96孔板,观察不同浓度卡巴胆碱(0.01～100μmol/L)对LPS刺激下单核细胞产生TNF-α、IL-6、IL-10的影响,并取最佳浓度进行受体机制探讨研究。实验分6组:空白对照(C)组仅加RPMI 1640培养液;LPS单独刺激(L)组仅加100ng/ml LPS刺激;烟碱预处理(N)组及卡巴胆碱预处理(K)组先用卡巴胆碱或烟碱(100μmol/L)预处理单核细胞5min,再加入100ng/ml LPS刺激;阿托品+卡巴胆碱预处理(A+K)组和α-银环蛇毒素(α-Bgt)+卡巴胆碱预处理(α-Bgt+K)组先在单核细胞悬液中加入胆碱能M受体拮抗剂阿托品或胆碱能N受体α7亚基特异性拮抗剂α-Bgt,5min后给予卡巴胆碱,5min后再给予LPS刺激。孵育12h(TNF-α、IL-6)或24h(IL-10)后,洗去细胞,加入生物素标记的检测抗体,经链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶催化底物显色后,全自动免疫斑点图像分析仪检测TNF-α、IL-6、IL-10含量。结果LPS单独刺激时,TNF-α、IL-6、IL-10含量较对照组明显升高(P<0.01)。用卡巴胆碱或烟碱预处理细胞后,TNF-α、IL-6含量明显下降,与LPS单独刺激组比较差异显著(P<0.01),但IL-10含量则无明显变化。在0.01～100μmol/L浓度范围内,随着卡巴胆碱浓度增加,其对LPS刺激下单核细胞产生TNF-α、IL-6的抑制作用也更加明显。阿托品预处理细胞后,卡巴胆碱对LPS刺激下单核细胞释放TNF-α、IL-6的抑制作用无明显变化,而α-Bgt预处理细胞后,卡巴胆碱对TNF-α、IL-6释放的抑制作用明显减弱。结论卡巴胆碱同烟碱一样具有强大的抗炎作用,该作用在单核细胞是通过N样胆碱能受体α7亚基实现的。
2009年01期 v.34 27-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K] [下载次数：148 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 于新;田增民;李士月;亓树彬;刘锐;王亚明;杜亚楠;
目的探讨脑脓肿的最佳治疗方案。方法回顾性分析1999年1月-2008年3月收治的45例脑脓肿患者的临床资料,其中男34例,女11例,年龄7～76岁,平均42.6岁。单发病变40例,多发病变5例;单房性脓肿43例,多房性脓肿2例。行抗生素治疗19例,立体定向引导脓肿穿刺16例、脓肿腔穿刺引流8例,开颅手术切除脓肿5例。结果19例接受内科保守治疗的患者中有3例因病情加重而改为立体定向手术治疗,其余16例经内科治疗后治愈,13例在6个月～5年的随访中未见脓肿复发。24例接受立体定向手术治疗的患者(其中包括3例保守治疗失败后改行立体定向手术者)全部获得成功,1例患者术后2周因脓肿复发施行了第2次定向手术,1例于立体定向脓肿穿刺结束时出现癫痫大发作。5例接受开颅手术的患者均完成脓肿的完整切除。出院时所有患者临床症状全部消失或明显改善,头颅CT或MRI复查显示脓肿腔消失。22例患者接受了4个月～3年的随访(平均14个月),均未见脓肿复发。结论对于脑脓肿的治疗,应根据病情选择方案,立体定向手术可作为脑脓肿的首选治疗方法。
2009年01期 v.34 31-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K] [下载次数：459 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 仲召阳;王东;李梦侠;彭斌;李增鹏;曹晓静;
目的结合C-12蛋白芯片检测结果,采用Bayes法建立多肿瘤标志物判别函数,以明确肿瘤类型,提高肿瘤诊断准确率;比较多肿瘤标志物判别函数与C-12多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的差异及对肿瘤诊断的临床意义。方法用C-12蛋白芯片法检测2 177例恶性肿瘤患者(肺癌836例,肝癌318例,胰腺癌84例,胃癌123例,肠癌338例,乳腺癌206例,卵巢癌47例,子宫内膜癌28例,食管癌197例)和2 111例正常及患良性疾病的非肿瘤患者的12项常见肿瘤标志物,并结合临床资料进行回顾性研究。应用Bayes法建立肿瘤判别诊断函数,比较12种肿瘤标志物和判别诊断函数对肿瘤诊断的准确率差异。结果成功建立了多肿瘤标志物的三级诊断判别函数。一级判别函数诊断的特异度为82.11%,灵敏度为71.28%,准确率为83.97%,而C-12蛋白芯片法检测12项肿瘤标志物的特异度为70.11%,灵敏度为66.10%,准确率为68.07%。二级判别函数能显著提高10种常规肿瘤诊断的灵敏度、特异度和准确率。三级诊断判别函数对确定部分肿瘤的类型有意义。结论基于Bayes法建立的C-12蛋白芯片联合检测判别函数具有较高的灵敏度、特异度和准确率,对肿瘤的诊断具有重要临床价值。
2009年01期 v.34 34-37+40页 [查看摘要][在线阅读][下载 255K] [下载次数：123 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 郑磊;张鹏;王前;曾方银;孙德华;
目的探讨心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)与肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)联合检测对于急性心肌梗死(AMI)诊断的价值及H-FABP在增加心肌标志物组合诊断效能方面的作用。方法以急诊就诊的急性胸痛症状患者133例为待研究人群,对每位患者入院第一管血血清H-FABP浓度及临床常用的心肌损伤标志物[cTnⅠ,肌红蛋白(Myo)]进行定量检测,随后根据WHO标准将研究对象分为AMI患者(46例)与AMI疑似患者(87例)。绘制3种标志物诊断AMI的受试者工作特征曲线(ROC曲线)并确定其最佳cutoff值,对设计出的3种诊断AMI的心肌标志物组合试验(cTnⅠ+H-FABP、cTnⅠ+Myo、cTnⅠ+Myo+H-FABP)的诊断准确度指标进行比较。结果根据ROC曲线确定的cTnⅠ、Myo、H-FABP诊断AMI的cutoff值分别为0.5、90、5.7ng/ml,据此算出的各心肌标志物组合诊断AMI的灵敏度分别为(按cTnⅠ+Myo、cTnⅠ+H-FABP、cTnⅠ+Myo+H-FABP的顺序)0.957、0.957、0.957,特异度分别为0.724、0.92、0.724,诊断符合率分别为0.805、0.932、0.805,其中cTnⅠ+H-FABP组合的特异度及诊断符合率均明显高于cTnⅠ+Myo和cTnⅠ+Myo+H-FABP组合(P<0.05)。结论新建立的心肌标志物组合cTnⅠ+H-FABP对AMI具有较高的诊断特异度和诊断符合率,在临床出现急性胸痛症状人群中诊断AMI的价值优于目前临床使用的心肌损伤标志物组合cTnⅠ+Myo。
2009年01期 v.34 38-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K] [下载次数：329 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ]
- 梁雪;陈幸华;张曦;孔佩艳;彭贤贵;曾东风;高蕾;张诚;王庆余;
目的培养残留耐柔红霉素(DNR)的Jurkat细胞,并对其耐药机制进行初步探讨。方法体外分离培养初发急性淋巴细胞白血病患者骨髓基质细胞(BMSCs)以模拟骨髓造血微环境,在与Jurkat细胞长期共培养的过程中选用含50ng/ml DNR的培养液进行培养,随着培养时间的延长,绝大部分Jurkat细胞漂浮死亡。残留的Jurkat细胞逐渐恢复增殖活力,并逐渐获得抗药能力,可以在DNR终浓度为50ng/ml的培养液中存活、增殖,将该细胞记为Jurkat/DNR。绘制Jurkat细胞和Jurkat/DNR细胞的增殖曲线,并检测其细胞周期分布、对多种化疗药物的耐药系数、DNR摄药量以及MDR1、bcl-2、bax和MRP mRNA的表达。结果嵌合于基质细胞层中的Jurkat细胞在DNR的持续刺激作用下逐步产生耐药性,获得残留耐DNR的Jurkat细胞。与Jurkat细胞相比,Jur-kat/DNR细胞中处于静止期的细胞比例增高、增殖速度缓慢、对多种化疗药物产生不同程度的耐药性、DNR摄药量减少,可以检测到MDR1基因表达,bax基因表达无显著差异,bcl-2及MRP基因表达水平升高。结论骨髓基质细胞滋养层是残留白血病细胞生存和再生长的微环境,可增强白血病细胞的抗药能力;通过改造白血病患者造血微环境有可能抑制残留白血病的形成及减少复发。
2009年01期 v.34 41-43+50页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K] [下载次数：139 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 余劲明;蔡德鸿;张桦;袁小澎;陈宏;
目的探讨静脉输注同种异基因大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)对体内细胞免疫功能的影响。方法从Wistar大鼠骨髓分离培养MSCs,通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。选择20只正常SD大鼠,随机均分为4个组,分别经静脉输注5×106/ml、5×105/ml、5×104/ml的MSCs及PBS各1ml。10d后取受体SD大鼠脾脏行混合淋巴细胞反应(MLR)检测淋巴细胞增殖率、外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD4+CD25+/CD4+T淋巴细胞比率,以评价体内MSCs对正常大鼠细胞免疫功能的影响。结果输注MSCs达5×106/ml的受体SD大鼠脾脏淋巴细胞增殖率为8.58%±0.27%,明显低于输注PBS大鼠(24.40%±5.21%,P<0.01)。输注5×106/ml MSCs的SD大鼠脾脏、外周血CD4+下降,CD4+CD25+/CD4+T细胞比率上升,与注射PBS大鼠相比差异有统计学意义(P<0.01)。输注5×105/ml、5×104/ml MSCs的大鼠各项指标与输注PBS大鼠相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度同种异基因MSCs静脉输入后可以部分抑制活体的细胞免疫功能,提高CD4+CD25+/CD4+T细胞的比率,为诱导移植免疫耐受及治疗自身免疫疾病提供了理论基础。
2009年01期 v.34 44-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 148K] [下载次数：142 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 余资江;康朝胜;李宏伟;余彦;
目的探讨体外分离、培养大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法,采用重组腺病毒介导的noggin基因体外诱导方法,观察MSCs向神经细胞的定向分化效应。方法原代培养MSCs 24h开始贴壁,呈梭形,集落样生长,纯化后,采用含noggin基因的重组腺病毒(pAdEasy-1-noggin)感染原代培养的MSCs,诱导骨髓MSCs分化为神经细胞。用鉴定神经特异性烯醇化酶(NSE)、神经元核抗原(NeuN)、神经丝蛋白(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫细胞化学方法对诱导后的细胞进行鉴定。结果倒置显微镜下观察可见,MSCs经重组腺病毒感染后48h,细胞向神经细胞分化,胞体呈锥形、多角形,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支。免疫组织化学鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达NSE、NeuN和NF-200,而GFAP表达阴性。结论利用密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;noggin基因重组腺病毒载体可成功诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化。
2009年01期 v.34 47-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K] [下载次数：204 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 王雪峰;何援利;
目的克隆大鼠B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)基因全长cDNA,构建及鉴定大鼠bcl-2基因慢病毒表达载体。方法采用RT-PCR法从大鼠脾脏组织中扩增全长bcl-2 cDNA,将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,测序正确后,将基因连接到慢病毒载体pGC-FU(含EGFP基因)中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-bcl-2,将pGC-FU-bcl-2质粒和包装质粒(pHelper1.0、pHelp-er2.0)共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞后,细胞即可分泌携带bcl-2基因的重组慢病毒。将重组慢病毒感染293T细胞,通过Western blot-ting鉴定目的蛋白bcl-2的表达。结果经DNA序列分析测定证实大鼠bcl-2基因序列与GenBank中一致;pGC-FU-bcl-2中携有正确的bcl-2基因,并能转染人胚肾上皮细胞;pGC-FU-bcl-2及包装质粒共转染包装细胞293T细胞能产生重组病毒pGC-FU-bcl-2;目的基因bcl-2能被重组慢病毒高效地转导入人胚肾上皮细胞中,并达到稳定表达,荧光显微镜下能直接观察到荧光蛋白,Westernblotting能检测到bcl-2蛋白在靶细胞中的表达。结论成功克隆了大鼠bcl-2基因并构建了重组慢病毒载体,包装出高浓度慢病毒,转染人胚肾上皮细胞后能够稳定表达bcl-2基因,为进一步研究该基因的功能及细胞凋亡相关疾病的治疗奠定了基础。
2009年01期 v.34 51-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K] [下载次数：215 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 陈雯;刘莉;张颖;李朝晖;齐迎春;张海峰;任清爱;刘珍荣;谢晓华;
目的观察醛固酮(ALD)在骨骼肌缺血再灌注所致心肌损伤中的动态变化。方法雄性Wistar大鼠62只,应用止血带结扎构建大鼠双下肢缺血再灌注模型,按照缺血及再灌注不同时间点随机分为以下9组:正常对照组(n=8),缺血2h组(n=4),缺血4h组(n=8),再灌注0.5h组(n=8),再灌注2h组(n=8),再灌注4h组(n=8),再灌注6h组(n=8),再灌注12h组(n=4),再灌注24h组(n=6),其中再灌注组缺血时间均为4h。观察各组大鼠血浆ALD、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白-T(TNT)及心肌ALD水平的变化。结果与正常对照组比较,缺血4h组血浆及心肌ALD水平开始上升(P<0.05),再灌注后二者继续上升。再灌注24h组血浆ALD达峰值,是正常对照组的6.2倍,且明显高于再灌注4h组(P<0.05),再灌注4～24h,心肌ALD持续稳定在较高水平;与缺血4h组比较,再灌注4、6、12、24h各组血浆及心肌ALD水平均明显升高(P<0.05)。与正常对照组比较,缺血2h后血浆CK-MB即开始明显上升,缺血4h后血浆TNT、LDH开始升高(P<0.05);再灌注后,上述心肌酶学指标继续上升,于再灌注4～6h达峰值,且明显高于缺血组(P<0.05)。结论骨骼肌缺血再灌注可导致全身及心肌局部醛固酮的持续激活,可能对骨骼肌缺血再灌注后远期心肌结构及功能损伤具有重要作用。
2009年01期 v.34 55-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 118K] [下载次数：115 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 禇彦明;谢巧英;刘文成;陶开山;
目的探讨c-fos反义探针诱导人肝癌HepG2细胞凋亡以及caspase3在其中的作用。方法人肝癌HepG2细胞分为3组,①对照组:加生理盐水10μl;②c-fos正义寡核苷酸(SO)处理组:加入SO10μl(5μg/μl);③c-fos反义寡核苷酸(ASO)处理组:加入ASO10μl(5μg/μl)。各组细胞再培养1h后进行后续实验。采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,并分别运用实时荧光定量PCR和Western blotting检测caspase 3在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果Hoechst 33258细胞染色显示,对照组和SO处理组的细胞核为弥散均匀的圆形或椭圆形荧光,而ASO处理组的细胞核或细胞质内可见致密浓染的颗粒、新月体或环状荧光,核固缩,部分切片可见核碎裂。PCR和Western blotting检测显示,与对照组和SO处理相比,ASO处理组caspase 3 mRNA和蛋白的表达均明显上调。结论c-fos反义探针可以诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,且caspase 3参与了此过程。
2009年01期 v.34 58-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K] [下载次数：201 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 王卫;魏东宁;陈玉萍;
目的观察N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体/通道复合物多胺位点拮抗剂arcaine对脑缺血损伤的神经保护作用。方法将45只Wistar大鼠随机分为对照组、缺血模型组、术前24h组、术前1h组及术后1h组。后4组大鼠均采用线栓法阻断大脑中动脉制作急性脑梗死模型。缺血模型组在造模成功后1h给予生理盐水(0.4ml/kg),术前24h组、术前1h组和术后1h组分别在术前24、1h和术后1h给予3mg/kg arcaine。检测大鼠神经功能行为、脑梗死体积,并观察光镜及电镜下脑组织损伤情况。结果神经功能评分显示,术前24h组、术前1h组和术后1h组大鼠神经功能行为评分(1.25±0.46、1.33±0.50、1.40±0.58分)与缺血模型组(2.63±0.52分)相比有显著差异(P<0.05),且术后给药对神经运动功能障碍的改善效果较术前给药效果差(P<0.05)。术前24h、术前1h组和术后1h组大鼠脑梗死体积百分比(分别为5.72%±2.91%、26.36%±5.30%、36.35%±6.66%)较缺血模型组(51.10%±3.86%)明显减少(P<0.05);术后1h组大鼠脑梗死体积百分比较术前24、1h组增加(P<0.05)。除对照组外,各组光镜下病理分级结果差异无统计学意义。电镜下观察各组大鼠皮层及海马神经元均有不同程度的变性坏死,其中缺血模型组病理损害最为严重。结论arcaine能够显著减少脑梗死的体积、减轻梗死所致的神经功能损伤,且预防给药效果更佳,但是arcaine对缺血所致神经元超微结构的损伤无明显逆转作用。
2009年01期 v.34 61-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 268K] [下载次数：109 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 黄宇贤;王杨;崔斐;崔彦芝;吴秉毅;郭坤元;
目的探讨索拉非尼提高高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞)对同种异体反应性自然杀伤(Allo-NK)细胞的杀伤敏感性及其相关机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP和Allo-NK细胞,并设3个实验组:①处理组(经索拉非尼10ng/ml共孵育4h的ABCG2High CNE2/DDP细胞);②未处理组(常规培养的ABCG2High CNE2/DDP细胞);③对照组(常规培养的K562细胞)。流式细胞技术检测处理组和未处理组细胞的ABCG2表达率和5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达率。乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测Allo-NK细胞对各实验组细胞的杀伤率。结果分离后的CNE2/DDP细胞的ABCG2表达率为91.40%±2.32%,分选出的CD3-CD16+CD56+(Allo-NK)细胞纯度大于90%。未处理组的ABCG2High CNE2/DDP细胞的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率分别为2.92%±0.33%、4.27%±0.33%、5.80%±0.62%、11.10%±3.15%、7.75%±1.14%,而处理组明显升高(分别为10.38%±1.23%、10.68%±1.26%、11.62%±1.22%、43.24%±4.42%、11.91%±0.88%;P<0.05)。在效靶比为10∶1、20∶1时,Allo-NK细胞对未处理组靶细胞的杀伤率为15.32%±1.34%、27.26%±6.81%,而对处理组靶细胞杀伤率为27.75%±4.12%、43.17%±5.92%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论索拉非尼通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体,使其对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。
2009年01期 v.34 65-68页 [查看摘要][在线阅读][下载 328K] [下载次数：133 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 曾龙驿;林可意;舒冏;张国超;余秋琼;孙卫平;江柏泉;林秀梅;
目的探讨舒洛地特对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率(UAER)及肾脏结构的影响。方法33只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、糖尿病组及舒洛地特组,每组11只。糖尿病组和舒洛地特组在空腹10h后按65mg/kg一次性腹腔内注射STZ溶液,正常对照组注射等量生理盐水,72h后尾静脉血糖≥16.7mmol/L及尿糖≥卅且持续3d为造模成功。其中,糖尿病组成模9只,舒洛地特组成模10只。造模成功后,舒洛地特组给予10mg/(kg·d)舒洛地特灌胃,糖尿病组和正常对照组给予等量的生理盐水灌胃,疗程12周。用药结束后次晨测24h UAER,并在光镜、电镜下观察各组大鼠肾脏组织结构的病理变化。结果糖尿病组的24h UAER明显高于正常对照组,舒洛地特组24h UAER高于对照组,但明显低于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,在光镜和电镜下,糖尿病组大鼠肾脏组织表现出明显的病理结构改变,舒洛地特组肾脏病理改变则明显减轻。结论舒洛地特可降低糖尿病大鼠UAER,明显减轻糖尿病大鼠的肾脏病理损害,从而起到肾脏保护作用。
2009年01期 v.34 69-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K] [下载次数：209 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 龚雨新;于化鹏;邓火金;孙尔维;罗宇维;
目的初步探索Th17细胞在哮喘小鼠发病中的作用机制。方法30只小鼠随机均分为对照组和哮喘组。哮喘组小鼠于第0天(开始实验当天)和第14天给予腹腔注射生理盐水混悬液(含OVA 2mg,氢氧化铝乳化液5mg)200μl致敏,第21天开始给予含1%卵蛋白(OVA)的生理盐水40ml,雾化吸入,1次/d,每次40min,连续6d。对照组以等体积生理盐水代替致敏液及雾化液,余同哮喘组。观察2组小鼠BALF中细胞比例变化和气道病理改变;流式细胞术检测外周血、胸腺和肺组织中的Th17细胞。结果哮喘组BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均显著高于对照组(P<0.01)。病理观察可见哮喘组小鼠的气道炎症以中性粒细胞及嗜酸性粒细胞浸润为主,而对照组无此变化。哮喘组外周血及胸腺中Th17细胞(分别为3.62%±0.58%、6.96%±1.35%)显著增高,与对照组(分别为0.68%±0.26%、0.80%±0.30%)比较有显著性差异(P<0.01);而肺组织中Th17细胞很少,哮喘组(0.64%±0.30%)与对照组(0.55%±0.23%)相比无统计学差异(P>0.05)。结论Th17细胞在哮喘中的作用可能是通过胸腺释放入外周血,促进中性粒细胞及嗜酸性粒细胞在气道内聚集,参与哮喘气道炎症的发生。
2009年01期 v.34 72-75页 [查看摘要][在线阅读][下载 287K] [下载次数：723 ] |[引用频次：34 ] |[阅读次数：1 ] - 张秀娟;黄劭;刘亚伟;陈茜;邓鹏;姜勇;
目的构建人铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu/Zn-SOD,SOD1)启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,并对其功能进行鉴定,为研究细胞内SOD1基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法提取人基因组DNA,PCR扩增SOD1 5′非编码区启动子序列(-1 499-+17);采用基因重组技术构建由SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染Hella细胞,观察静息或佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达,以检测SOD1启动子的转录活性及其基因表达。结果酶切和DNA测序证明所构建红色荧光蛋白报告基因载体正确;该表达载体静息状态下在Hella细胞表达少量红色荧光蛋白,经PMA刺激后,能够表达较多高亮度的红色荧光蛋白。结论成功构建了SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,其对相关刺激有很好的反应,可用于SOD1基因表达信号调控机制的研究。
2009年01期 v.34 76-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K] [下载次数：321 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ]
- 李文兵;高德伟;王晶;卢文宁;
目的探讨老年住院患者餐后低血压(PPH)及直立性低血压(OH)的发生率及临床特征。方法应用无创心电监护仪测量78例在老年病房住院治疗、病情相对平稳的老年人进餐前后及晨起站立3min后的血压。结果78例患者中男性69例,女性9例,年龄82±6岁,其中57例出现PPH,餐后血压下降37±6mmHg,47例出现OH,站立后血压下降41±5mmHg,36例同时出现PPH及OH,仅10例(13%)既无PPH,也无OH。有症状的PPH占74%(42/57),以嗜睡及晕厥最为常见;有症状的OH占64%(30/47),以头晕及跌倒倾向最为常见。结论PPH及OH是老年住院患者常见的临床现象,二者症状差异明显,且经常合并存在,危害较大。进一步了解PPH及OH的发生规律和临床特征,采取有效措施防止老年人因餐后血压下降及直立性低血压所致意外非常重要。
2009年01期 v.34 81-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 118K] [下载次数：294 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 张宏艳;梁峰;贾志凌;矫健;王茹;彭雁;于忠和;
目的探讨和比较乳腺钼靶X线摄片和超声对临床触诊阴性乳腺病灶的诊断价值。方法回顾性分析77例触诊阴性乳腺病例(87个病灶)的临床资料,所有病例均行乳腺超声和钼靶X线摄片检查,并经穿刺活检或手术切除标本获得病理诊断。分析良恶性乳腺病变患者的年龄和月经状态;总结乳腺癌病灶在钼靶X线摄片和超声诊断中的影像学特点,并比较两种方法的诊断效能。结果全组87个触诊阴性的乳腺病灶中,乳腺癌20个(20例患者),占23%(20/87),其中95%(19/20)为0-Ⅰ期的早期乳腺癌;良性病灶67个(57例患者),占77%(67/87)。乳腺癌患者的年龄明显高于良性乳腺病变患者(P<0.01),但月经状态无明显差异。钼靶X线摄片、超声诊断乳腺癌病灶的阳性率分别为75%(15/20)和55%(11/20);其主要影像学特点分别是恶性钙化和边界不清的低回声占位,分别占诊断阳性病灶的67%(10/15)和55%(6/11)。钼靶X线摄片诊断触诊阴性的乳腺病灶的敏感性、特异性和准确性(分别为75%、64%、67%)均优于乳腺超声(分别为55%、21%、29%)。20例乳腺癌患者经超声或钼靶引导下采用金属丝定位,行切除手术。11例患者行保乳手术,保乳率达55%(11/20)。结论钼靶X线摄片和超声检查在触诊阴性的乳腺癌的早发现、早诊断、早治疗中发挥着重要作用。其中,钼靶X线摄片检查更为重要。
2009年01期 v.34 84-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K] [下载次数：284 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] - 姜胜利;高长青;李伯君;肖苍松;吴扬;任崇雷;赵涛;
目的探讨三尖瓣置换术的手术指征、术式及围术期处理方法。方法对28例三尖瓣置换术患者的临床资料进行回顾性分析,其中先天性心脏病6例(2例为再次心脏手术),风湿性心脏病17例(12例为再次心脏手术),感染性心内膜炎3例,其他2例。同期行主动脉瓣二尖瓣置换2例,二尖瓣置换3例,房间隔缺损修补术1例。采用机械瓣膜8枚,进口生物瓣膜20枚。手术均在体外循环下进行,9例采用中低温心脏停跳并行心肌保护术,另外19例均采用浅低温心脏不停跳方法行三尖瓣置换手术,其中6例经股动脉插管。24例采用胸骨正中切口,4例采用右胸前外侧切口经胸腔进行手术。结果3例患者术后早期发生重度低心排,均为联合瓣膜置换患者,其中1例死亡;1例发生三度房室传导阻滞,行永久心脏起搏器植入;2例术前合并肾功不全、术后加重,行血液透析治疗后稳定;1例手术切口延迟愈合,经多次换药后痊愈。除死亡患者外,其余患者复查超声均显示瓣膜功能正常,无瓣周漏。结论三尖瓣置换术是安全有效的手术方法,采用浅低温心脏不停跳方法对单纯的三尖瓣置换术可起到满意的心肌保护效果;风湿性心脏瓣膜术后远期可能发生重度三尖瓣病变,需要进行再次心脏手术,采用股动脉插管经右胸前外侧切口入路可降低再次心脏手术风险;三尖瓣病变严重患者大都合并全身代谢营养障碍,对营养障碍的纠正应贯穿于整个围手术期;对于三尖瓣置换的患者,生物瓣可能是较好的选择。
2009年01期 v.34 87-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 80K] [下载次数：202 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 刘学军;凡启军;万汉锋;刘国钧;高金建;黄加云;陈波蓓;
目的探讨射频组织减容(RFVTR)用于阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者上气道全方位手术治疗的疗效和手术前后生活质量的变化。方法根据术前定位诊断的结果,对86例OSAHS患者行多平面RFVTR治疗,治疗前和治疗后6个月行睡眠呼吸监测(PSG),比较呼吸暂停低通气指数(AHI)、最低血氧饱和度(LSaO2)、Epworth嗜睡评分(ESS)、打鼾等级评分(SSS)和Calgary生活质量指数(SAQLI),评价RFVTR治疗OSAHS的疗效。结果86例手术均顺利进行,对患者进行综合疗效评价:治愈率为34.9%,显效率为41.9%,有效率为18.6%,总有效率为95.3%。手术前后AHI分别为44.8±22.6和30.5±21.6,LSaO2分别为72.5±9.5和76.7±8.7,术后AHI和LSaO2均较术前明显改善(P<0.05)。Epworth嗜睡程度评分由术前15.3±4.4下降至术后11.6±4.1,SSS鼾声等级由术前的6.1±1.6下降至5.2±1.7;SAQLI总分从术前3.9±1.1提高到术后4.7±1.2,RFVTR治疗后白天嗜睡程度和鼾声评级以及患者生活质量均较术前明显改善(P<0.05)。结论RFVTR操作便捷、安全,患者痛苦小、恢复速度快且容易接受,是治疗OSAHS的有效方法,可明显改善OSAHS患者的生活质量。
2009年01期 v.34 89-91页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K] [下载次数：82 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 黄昌林;杨卫强;朱履刚;
目的随机抽样调查2006、2007年全军监控点部队军训伤的发生与分布情况,分析其流行病学特点及趋势。方法随机抽取全军9个军事训练伤监控点部队,以2006-2007年的参训军人为研究对象,按照《军事训练伤诊断标准及防治原则》的标准,采集所有军训伤资料数据并进行相关分析。结果两年中被调查的71 836名参训军人共发生各类训练伤6 262例,其中2006年参训军人35 582名,发生军训伤2 455例,总发生率6.9%,2007年参训军人36 254名,发生军训伤3 807例,总发生率10.5%,两年军训伤发生率有显著性差异(P<0.01)。骨关节损伤、软组织损伤、器官损伤的构成比2006年分别为30.0%、63.7%、6.3%,2007年分别为47.6%、42.5%、9.9%,其中骨关节损伤、器官损伤所占比例2007年明显高于2006年(P<0.01)。2007年度军训伤发生的高峰时间后移,器官损伤中以中暑比例较高。结论2006、2007年军训伤的发生率较往年有明显上升,构成比也发生了较大变化,器官、骨关节损伤应成为防治的重点;加强军事训练伤知识的普及教育以及严格贯彻《军事训练健康保护规定》是有效降低其发生率的关键。
2009年01期 v.34 92-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K] [下载次数：301 ] |[引用频次：37 ] |[阅读次数：0 ] - 杨卫平;胡博华;Donald Henderson;
目的通过检测3种半胱氨酸蛋白酶(caspase-3、caspase-8和caspase-9)在耳蜗基底膜的活性变化,揭示强脉冲噪声暴露后耳蜗毛细胞死亡的信号通路。方法成年灰鼠27只,随机分为实验组和对照组。接受噪声暴露的实验组动物共15只,3种半胱氨酸蛋白酶荧光标记动物各5只。未经噪声暴露的对照组动物共12只,3种半胱氨酸蛋白酶荧光标记动物各4只。将动物暴露于平均压力峰值级为155dB SPL的脉冲噪声75次,噪声暴露后2h,用微量注射器分别将新鲜配制的3种半胱氨酸蛋白酶荧光染色液30μl缓慢注入动物双侧内耳。耳蜗内灌注后1h,动物断头,取出双耳听泡,分离耳蜗基底膜。采用细胞核DNA荧光染料碘化丙锭(PI)对耳蜗基底膜毛细胞核进行染色,荧光显微镜下观察强脉冲噪声暴露后的耳蜗基底膜凋亡、坏死毛细胞3种半胱氨酸蛋白酶荧光染色的变化。结果对照组灰鼠的耳蜗毛细胞核周围未见3种半胱氨酸蛋白酶阳性荧光标记物。实验组噪声暴露后耳蜗基底膜以核固缩、核碎裂为特征的凋亡外毛细胞核周围存在caspases-3、caspases-8和caspases-9绿色荧光标记物,而以核肿胀为特征的坏死外毛细胞核周围未见3种半胱氨酸蛋白酶阳性荧光标记物。结论强脉冲噪声暴露后耳蜗毛细胞凋亡同时通过caspases-9相关的内源性和caspases-8相关的外源性两条信号通路启动完成,而毛细胞坏死则是通过非caspases途径激活的。
2009年01期 v.34 95-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K] [下载次数：228 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：0 ] - 王瑞娟;彭瑞云;高亚兵;常公民;徐新萍;李杨;马俊杰;王水明;
目的筛选中子辐射后小鼠肠道损伤的差异基因。方法12只二级雄性BALB/c小鼠,3Gy中子照射后6h,取小鼠空肠组织,提取RNA,采用小鼠全基因组寡核苷酸芯片技术分析其基因表达谱的变化,mas系统对差异基因进行分类,RT-PCR验证芯片筛选的部分差异基因。结果中子照射后6h,在所分析的35 852条目的基因中,小鼠空肠组织中共有608个差异基因,其中上调的有277个,下调的有331个。mas系统的功能分类结果显示这些差异基因涉及到代谢、转运、消化、应激、细胞黏附、细胞生长发育和分化、细胞死亡、细胞运动、细胞通讯、细胞周期、DNA代谢和修复、生殖相关基因,另外还有一些未知的功能基因等。与中子辐射肠道损伤密切相关的有应激、细胞生长与死亡、信号转导、细胞周期、DNA损伤与修复等类别的基因。RT-PCR验证了部分结果,与芯片一致。结论中子辐射后,损伤的空肠组织中存在大量差异基因,表明中子辐射对肠道是一种多靶点的损伤;筛选出的差异基因可能为中子辐射肠道损伤的敏感基因和防治靶点。
2009年01期 v.34 98-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 289K] [下载次数：140 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 张达矜;曲佳;熊鸣;乔媛媛;王大鹏;虞积耀;赵晓航;
目的血管内皮细胞不仅是机体循环系统和组织间的重要屏障,而且具有重要的代谢和内分泌功能。本研究主要观察海水对血管内皮功能基因表达的影响。方法12只Wistar大鼠随机均分为腹部开放伤合并海水浸泡组(实验组)和单纯腹部开放伤组(对照组),分别于海水浸泡或术后2h采集腹部开放伤大鼠小肠系膜血管组织,以实时定量PCR芯片法检测两组血管内皮通透与张力、血管生成、内皮激活与损伤等相关的84个功能基因的表达差异。差异表达大于2倍视为表达上调或下调。结果与单纯腹部开放伤相比,腹部开放伤合并海水浸泡大鼠小肠系膜血管内皮77.38%(65/84)的功能基因表达水平发生了明显改变,分别有61.90%(52/84)和15.48%(13/84)的基因表达水平上调和下调。其中,趋化因子Cxcl2表达水平升高了29.82倍,L-选择素表达水平下降了46.59倍。全部血管通透性与张力相关基因(12/12)和凝血激活相关基因(6/6)表达改变大于2倍。结论海水浸泡广泛引起腹部开放伤大鼠血管内皮重要功能基因表达改变,内皮功能受损。
2009年01期 v.34 102-106页 [查看摘要][在线阅读][下载 222K] [下载次数：176 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ]